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电泳仪标准操作规程
[ 2013/7/1 14:49:04 ] [转载请注明来源:就是要仪器网]

                                                                电泳仪标准操作规程 
1.材料与试剂
  1.1  pH8.6离子强度0.05巴比妥缓冲液
  1.2  0.5%氨基黑染色液
  1.3  透明液:
              冰醋酸           3 份
              95%乙醇         2 份
              混合即可
  1.4  醋酸纤维膜
    
2.操作方法
   2.1 将醋酸纤维膜条浸于巴比妥缓冲液中,浸透后用竹镊子夹到滤纸上,吸去过多的水分。将膜的光滑面向下搭在电泳槽两侧的滤纸桥上,注意搭平。
   2.2 加样 用微量加样器于负极端1.5cm处加样1μl~3μl,注意样品要成一条直线且垂直方向。也可用血球计数板盖玻片蘸取样品轻轻点上。
   2.3  电泳 电压10V/cm~15V/cm或0.4mA/cm~0.6mA/cm电泳45min~60min,至电泳区带展开约2.5cm~3.5cm时,关闭电源。
   2.4 染色 将膜浸于氨基黑染色液中,染色数分钟。
   2.5 透明 将染色的醋酸纤维膜浸于透明液中,漂洗5min ~10min,至背景呈乳白色为止。为了防止膜上出现许多气泡,可以逐渐升高透明液浓度10%、20%以至30%。
   2.6 结果观察及保存 透明后,将膜贴于玻璃上,干后取下,即可观察结果并保存。
   2.7 定量 将各区带剪下,分别浸于4Mol/L NaOH 4ml中,振摇数次,约2h,色泽被浸出,于580nm~620nm比色,测出各区带的OD值。同时剪一块大小相似无蛋白的透明膜同样处理,做为对照。  
       计算各区带蛋白含量百分比(以血清为例)
       总OD值T=A+α1+α2+β+γ  白蛋白%=A/T×100%  以此类推。 

3. 仪器的基本技术性能 
   3.1 电泳区带分离清楚,比琼脂平板电泳分辨率高;
   3.2 可以定量;
   3.3 样品用量少,只需要几微升即可。

4. 注意事项
   4.1 醋酸纤维膜孔隙小,含水量少,且较薄,因此它对热很敏感,故应注意控制电压、电流。
   4.2 样品不可过多,只需几微升即可。
   4.3 加样一定要呈直线、垂直、分布均匀,这样泳动的区带整齐、不歪。
   4.4 注意醋酸纤维膜的质量,浸泡很久仍有大块白色硬点者可弃之不用

 

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