Gelfree 8100蛋白质分组系统

随着生物质谱技术的快速发展，蛋白质和多肽分析的分辨率、灵敏度、准确性、鉴定能力大为提高。尤其是Top-down蛋白质鉴定方法大量使用后，传统的一维、二维电泳或液相色谱等样品制备技术已经不能满足需要。分析前如何降低样品的复杂程度、获得完整蛋白质、富集低丰度蛋白质、降低高丰度蛋白质对低丰度蛋白质的干扰、保留蛋白质的各种翻译后修饰状态、提高样品处理通量等，已成为蛋白质样品制备方法的重要前提。

美国Protein Discovery公司（现已被英国Expedeon公司收购）推出了一套新颖的蛋白质分组系统—Gelfree 8100。该系统使用凝胶洗脱液相组分截留电泳技术（gel-eluted liquid fraction entrapment electrophoresis，GELFrEE），基于蛋白质分子量的不同，对完整蛋白质进行分组，使用移液器在液相中回收蛋白质。该系统能在短时间内同时处理8个样品。在3.5kDa—500kDa范围内，相对于其它传统分组方法，具有上样量大、重现性好、分辨率高、回收率高、分离速度快和操作简单的优点。能增大蛋白质组分析的覆盖范围，改善后期质谱分析的结果，提高蛋白质鉴定结果的可信度。

Gelfree 8100蛋白质分组系统由主机和8通道电泳槽两部分构成。主机设计紧凑，能为8个独立的电泳通道提供电压。使用触摸屏，可以设置电压、分组数和使用的通道数等参数。运行过程中，触摸屏实时显示每个通道电泳状态及电压电流值。电泳槽由五个部分组成，分别是：阴极缓冲液槽、上样槽、电泳凝胶管、样品收集槽、阳极缓冲液槽。电泳凝胶管是内装预制SDS-PAGE胶的玻璃管。缓冲液槽与上样槽及收集槽之间由一个截留分子量为3.5kDa的膜分隔开。

Gelfree 8100蛋白质分组系统的工作原理：

样品和样品缓冲液混合后加入到上样槽内。

电泳开始后，蛋白质首先在浓缩胶内浓缩。

蛋白质进入分离胶之前被浓缩成一条窄带。

在分离胶内，较小的蛋白质移动更快，更先从胶内进入收集槽。

到达预设的收集时间时，电泳暂停，从收集槽中收集第一组分的蛋白质。 

继续电泳，重复收集操作，直至完成所有组分的收集。

对于不同的蛋白质上样量，优化好收集间隔时间，可以最大程度的提高蛋白质的回收效率。

Gelfree 8100蛋白质分组系统的特点：

  基于分子量的不同对完整蛋白质进行分离；

 简化蛋白质组成的复杂程度，缩小复杂蛋白质样品的动态范围，便于使用LC-MS/MS进行Bottom-Up蛋白质组学研究；

 蛋白质回收后保留其完整性，便于进行Top-Down蛋白质组学研究，分析翻译后修饰、蛋白质异构体、氨基酸衍生物等；

 蛋白质分离范围高达3.5kDa—500kDa；

 8个分组通道，满足高通量样品处理的要求，每个通道最多可将样品分为30个组分；

 用户可根据需要自行设置蛋白质分组程序，分离纯化特定的目标蛋白；

 样品容量大，每个通道蛋白质上样量最高可达1mg，是普通一维电泳的5倍以上，有利于富集低丰度蛋白质；

 样品回收率高，>80%；

 结果高度的重现性，CV<15%；

 电泳过程不受蛋白质疏水性或等电点的影响；

 蛋白质样品在液相中回收，避免了传统一维、二维电泳后的染色和条带或点位切割步骤；

 蛋白质回收后在溶液内消化，免去了费时的胶内消化步骤；

 特别适合为LC-MS/MS、MALDI-TOF或免疫印迹等分析方法制备样品；

电泳槽： 

一次性电泳槽包含8个独立通道，可同时使用1—8个通道，处理1—8个样品，未使用的通道可保存供以后使用。